Ćw.1
REAKCJA PAS- barwienie polisacharydów w ścianach komórkowych roślin
Ø Utrwalacz CrAF
Ø Odczynnik Shiff’a
Ø Kwas nadjodowy 1%
Ø Woda siarkowa
Ø Woda destylowana
Ryc. Z internetu
Fluorescencyjne barwienie celulozy w ścianie komórek roślin
Ø 0,01% wodny roztwór kalkofluoru
Ø gliceryna
Ø woda destylowana
W wyniku reakcji z kalkofluorem celulozowe ściany komórkowe fluoryzują na kolor biało-niebieski.
Ryc. Z zajęć
Ćw.2
Reakcja Feulgena na stożkach wzrostu korzeni cebuli
Ø Alkohol absolutny
Ø Kwas octowy lodowaty
Ø Szereg alkoholowy: 96%; 70%; 50%; 20%
Ø 1M kwas solny (1N)
Ø Odczynnik Shiffa
Barwienie DNA fluorochromem DAPI w komórkach stożków wzrostu korzenia cebuli
Ø Roztwór DAPI
Ø Gliceryna
Ø 1M kwas solny
Ø
Ø preparat rozgniotowy
Ćw.3
Badanie oporności osmotycznej erytrocytów z wykorzystaniem spektrofotometru
Ø 1% roztwór buforowanego NaCl
Ø krew żylna pobrana do heparynowanej
Opis bo brak barwienia
Wykorzystując 1% roztwór NaCl przygotować zestaw roztworów o malejącym stężeniu soli wg tabeli:
Nr próby
1
2
3
4
5
6
7
1% NaCl
(w ml)
4,5
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
H20 dest.
3,5
4,0
Stężenie NaCl (%)
0,9
0,6
0,4
0,3
0,2
0,1
Ø W 7 ponumerowanych probówkach umieścić po 5 ml roztworów o odpowiednim stężeniu NaCl (wg tabeli)
Ø Do każdej z próbówek dodać po 0,05 ml krwi, delikatnie wymieszać. Probówki pozostawić 30 minut w temperaturze pokojowej, po czym ponownie wymieszać zawartość próbówek i wirować przy 3000 obr./min (1680g) przez 5 minut.
Ø Zmierzyć ekstynkcję przy długości fali 560 nm dla supernatantu roztworu wzorcowego (probówka nr 1), następnie dla każdego z supernatantów z pozostałych probówek (wobec NaCl 0,9% )
Ø Wykreślić krzywą oporności osmotycznej erytrocytów. Na układzie współrzędnych zaznaczyć: na osi rzędnych - procent hemolizy (za 100% hemolizy przyjąć wartość ekstynkcji odpowiadającą supernatantowi z probówki, w której stężenie NaCl wynosiło 0,1% - probówka nr 7), na osi odciętych – stężenia NaCl. Określić zakres oporności osmotycznej erytrocytów.
Ćw.4
Obserwacja mitochondriów w komórkach roślin i grzybów po barwieniu zielenią
Janusa B
Ø 0,02% roztwór zieleni Janusa B
A. Przyżyciowe barwienie mitochondriów zielenią Janusa B w skórce liścia spichrzowego cebuli
B. Przyżyciowe barwienie mitochondriów zielenią Janusa B w komórkach drożdży
Wynik barwienia:
Wybarwienie mitochondriów przy pomocy zieleni Janusa B jest warunkowane aktywnością oksydazy cytochromowej. Barwnik po wniknięciu do komórki ulega redukcji w wyniku czego traci barwę niebieską. W mitochondriach przy dostatecznej ilości tlenu zieleń Janusa zostaje utleniona i nabiera niebieskozielonego zabarwienia. Mitochondria są widoczne w komórkach jako niebiesko-zielone ziarnistości.
Ćw. 5
Homogenizacja materiału
Ø Materiał (liście) umyć pod bieżącą wodą i osuszyć bibułą
Ø Około 10-20g materiału pociąć nożyczkami na drobne fragmenty i umieścić w homogenizatorze nożykowym zawierającym 50ml roztworu do homogenizacji
Ø Materiał homogenizować około 1min. przy prędkości 6 – 7 tys. obrotów na minutę w homogenizatorze nożykowym
Ø Uzyskany homogenat przefiltrować do zlewki przez podwójną warstwę gazy i tkaninę nylonową
Izolacja chloroplastów na drodze wirowania różnicowego
Przystępując do wirowania należy najpierw dokładnie zrównoważyć probówki
Wirowanie sru tu tu tu..
Ćw.6
Wykrywanie glikogenu metodą PAS w granulocytach
Ø Odczynnik Giemsy
Wynik reakcji: glikogen wybarwia się na kolor amarantowo-czerwony w granulocytach i słabiej w limfocytach. Jądra komórek leukocytów wybarwiają się na niebiesko.
Wykrywanie lipidów w granulocytach
Ø Sudan czarny B
...
buniagumis