genetyka.pdf

6. Wypisz etapy wizualizacji sondy wyznakowanej DIG po hybrydyzacji

*na membran nanieć buor przemywający (01 M kwa maleinowy 015 M NaCl; pH 7,5)

uzupełniony o Tween20 do tż 03% v/v

*inkubować 5’ temp pok uunąć buor

*nanieć buor blokujący (01 M kwa maleinowy 015 M NaCl pH 75 oraz 5% odtłuzczone mleko)

*inkubować 30’ temp pok potem uunąć

*Rozcieńczyć przeciwciała anti-DIG-AP w tounku 110000 w wieżym buorze blokującym

*pokryć blot tym buorem inkubować 30’ z delikatnym wytrząaniem

*zlać buor przemyć membran 2x15min buorem przemywającym

*uunąć buor nanieć buor równoważący (01M Tri-HCl 01M NaCl pH 95) inkubować 5’

*uunąć buor rozpucic CSPD e tounki 1100 w bu równo

*wlać do zalki inkubować 5’

*wyjąć membran ocieknie

*umiecić membran pomirzy 2 wartwami olii pożywczej uunąć powietrze zamknąć w kaecie z

błoną RTG ekpozycja przez noc